染色薄層色譜糖脂

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染色薄層色譜可以非常敏感的檢測(cè)功能活性碳水化合物配體蛋白受體（1，2）。這些碳水化合物結(jié)構(gòu)檢測(cè)糖脂分子從復(fù)雜的混合物中提取出相關(guān)的靶組織。一些蛋白質(zhì)受體可能分析：抗體，嵌合免疫球蛋白蛋白，凝集素，選擇素，毒素，和其他碳水化合物結(jié)合蛋白。這種方法可以測(cè)定的數(shù)量，大小（值）和費(fèi)用（結(jié)合離子色譜法）的碳水化合物配體（）。此外，這種方法在確定艾滋病方法用于純化的糖脂配體和隨后監(jiān)測(cè)凈化過(guò)程（3，4）。相反，糖蛋白，糖脂含有一個(gè)半抗原寡糖和分子因此，一旦純化和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，糖脂是功能活躍的碳水化合物序列的蛋白受體的研究。

材料：

層析槽

支持薄層硅膠板熒光指標(biāo)

玻璃微量注射器

培養(yǎng)皿（150毫米）

玻璃顯微鏡幻燈片

# 1過(guò)濾紙濾紙

加熱干燥機(jī)

噴涂裝置

塑料擠壓瓶

聚異丁基甲基丙烯酸甲酯

丙酮

氯仿

甲醇

氯化鉀

磷酸鹽緩沖液（0.01米磷酸鈉，氯化鈉的先鋒，PH值7.6）

牛血清白蛋白

苔黑酚

間苯二酚

二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（民建聯(lián)）

協(xié)議：

制備的色譜槽

1。添加150毫升氯仿/甲醇／0.25%氯化鉀（5時(shí)04分01秒）到一個(gè)玻璃層析槽（25厘米×27厘米×10厘米）內(nèi)襯過(guò)濾紙，蓋緊。

2。允許蒸汽坦克平衡至少2小時(shí)。的結(jié)果是，準(zhǔn)備一個(gè)新的坦克日?qǐng)?bào)。

制備硅膠板

1。切板所需的大小用剪刀。*佳高度為10厘米。

2。畫一個(gè)非常輕鉛筆線1.5厘米的平行板的底部被不小心劃傷硅膠。

3。使用玻璃為糖脂，現(xiàn)場(chǎng)樣品沿5毫米路徑上的鉛筆線。這些不同的路徑（道）的2.5毫米。

4。待測(cè)樣品的糖含量的地衣酚噴霧應(yīng)放在一起一部分的薄層板分離的樣品染色。

層析硅膠板

1。使用一對(duì)長(zhǎng)鉗，抓板頂部和在坦克與斑樣本只是以上級(jí)別的溶劑。允許頂部邊緣緊靠后的發(fā)展室。

2。掩護(hù)坦克緊密，使板保持原狀直到升溶劑線到達(dá)板的頂部（約30 - 45分鐘）。

3。將薄層板的頂部邊緣的抓鉗和允許板徹底干燥空氣下化學(xué)通風(fēng)櫥。

染色標(biāo)準(zhǔn)的碳水化合物

1。剪除部分的薄層板含有糖脂標(biāo)準(zhǔn)。

2。在化學(xué)煙罩，噴板簡(jiǎn)述0.1%地衣酚溶解在5% H2SO 4。

3。立即放在一個(gè)加熱爐在120攝氏°大約5 - 10分鐘。

4。如果染色弱，步驟2和3可以重復(fù)。

制備的層析板染色

1。2µ我正（碳水化合物結(jié)合蛋白）和消極的（牛血清白蛋白）控制（0.5毫克/毫升）在底部的薄層板和允許完全干燥空氣。

2。浸漬薄層板為90秒，在一個(gè)玻璃培養(yǎng)皿（150毫米）含有0.1%的解決polyisobutylmethacrylate珠predissolved丙酮。的結(jié)果，板應(yīng)進(jìn)入溶液迅速，長(zhǎng)邊的，在45度角。

3。拆下板與直立根據(jù)化學(xué)煙罩完全風(fēng)干。

4。測(cè)量表面面積的薄層板。

5。噴霧薄層板與磷酸鹽緩沖液含1%牛血清白蛋白和大力淹沒(méi)立即在同一溶液中培養(yǎng)皿1小時(shí)。

染色的主要碳水化合物結(jié)合蛋白

1。稀碳水化合物結(jié)合蛋白（如抗體）10µ克/毫升含1%牛血清白蛋白在公共電視網(wǎng)。數(shù)額將覆蓋65µ升/平方厘米的薄層板的表面。

2。準(zhǔn)備一個(gè)底座略小于薄層板與玻璃顯微鏡幻燈片底部的一個(gè)培養(yǎng)皿。

3。將薄層板從pbs-1 %牛血清白蛋白，排水，和水平放置，硅膠的一面，上蓋的玻璃滑動(dòng)底座。不要讓板干在任何步驟直到結(jié)束