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保存溫度: 2-8℃
封板膜: 2片(48)/2片(96)
產(chǎn)品用途:科研 實驗
規(guī) 格:20T電話:18221656311
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實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中水平。用純化的其抗體包被微孔板,制成固相抗體。往包被單抗的微孔中依次加入本產(chǎn)品,再與HRP標(biāo)記的其抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中產(chǎn)品的濃度。
試劑盒組成:
1、30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2、酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(240 ng/L) 0.5ml×1瓶
3、酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4、樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5、顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6、顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標(biāo)本要求 :
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
120 ng/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60 ng/L 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30 ng/L 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15 ng/L 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5 ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
4.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
5.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
1.準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應(yīng)10分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內(nèi)度OD值
7.計算
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更新時間:2024/10/8 9:18:31
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